1. Что включают в себя доклинические исследования?
Отвечать:Неклинические эксперименты включают фармакологические исследования, тесты на общую токсичность, токсикокинетику и неклинические фармакокинетические эксперименты, тесты на репродуктивную токсичность, тесты на генотоксичность, канцерогенность и другие тесты (фототоксичность, зависимость, иммунотоксичность) и т. д. В случаях комбинированной терапии также могут проводиться неклинические исследования безопасности комбинированной терапии. Для определенной высокой доли (более 10% от общего системного воздействия и уровень воздействия в исследованиях на животных ниже, чем воздействие на человека) может потребоваться проведение неклинических исследований безопасности метаболитов.
2. Какова цель доклинической оценки безопасности?
Отвечать:Целью неклинической оценки безопасности обычно является выяснение характеристик токсических реакций, связанных с целевыми органами, зависимостью от дозы, взаимосвязью воздействия и потенциальной обратимостью. Эта информация может быть использована для оценки безопасной начальной дозы и диапазона доз для клинических испытаний на людях (как упоминалось ранее, NOAEL необходимо получить в токсикологических экспериментах для расчета MRSD, максимальной рекомендуемой начальной дозы), а также для определения клинических показателей мониторинга потенциальных побочных реакций.
3. Какие доклинические исследования необходимы для первых испытаний на людях?
Отвечать:Для этого вопроса сначала необходимо выяснить тип препарата. ICH M3 (R2) применим к общим ситуациям в разработке лекарств и содержит общие руководящие принципы. Для биологических препаратов доклинические исследования должны проводиться в соответствии с требованиями ICH S6.
⑴Фармакокинетика:Перед подачей заявки на IND достаточно данных о метаболизме исследуемого продукта у разных видов и данных о метаболизме in vitro у людей, а также скорости связывания с белками плазмы. Информация о всасывании, распределении, метаболизме in vivo и выведении должна быть собрана до начала крупномасштабных клинических испытаний (обычно фазы 3). Эксперименты по всасыванию PK обычно проводятся на нескольких видах до подачи заявки на IND и определения PCC, чтобы лучше понять характеристики PK препарата у разных видов, хотя в данном случае это не требуется, что немного странно.
⑵Фармакология безопасности:Оценка воздействия на сердечно-сосудистую, центральную нервную и дыхательную системы должна быть завершена до подачи IND, что является комбинацией стандартных тестов фармакологии безопасности. При необходимости в ходе клинических испытаний могут проводиться дополнительные эксперименты по фармакологии безопасности.
⑶Токсичность повторной дозы:Как правило, краткосрочный тест на хроническую токсичность организуется на основе ранней схемы дозирования IND. Если период дозирования необходимо продлить позже, для его поддержки требуется более долгосрочный тест на хроническую токсичность.
⑷Генотоксичность:При относительно низкой стоимости комбинированный тест на генотоксичность может быть завершен до подачи заявки на IND.
⑸Канцерогенность:Перед одобрением препарата необходимо провести испытания на канцерогенность.
⑹Репродуктивная токсичность:Наблюдения и оценки репродуктивной системы должны быть включены в тесты токсичности повторных доз до подачи IND для предварительной оценки репродуктивной токсичности, при этом строгая контрацепция в клинических испытаниях будет достаточной. Исследования репродуктивной токсичности фазы I/II должны быть завершены до крупномасштабных клинических испытаний, а исследования репродуктивной токсичности фазы III должны быть завершены до одобрения.
⑺Фототоксичность:Оценка фототоксичности должна быть завершена до подачи IND. Если молярная поглощательная способность превышает 1000 M-1cm-1, считается, что существует риск фототоксичности, и перед крупномасштабными клиническими испытаниями следует провести тестирование фототоксичности.
4. Как устанавливать дозы в токсикологических тестах? Как выбирать максимальную дозу?
Отвечать:Ссылаясь на «Технические руководящие принципы испытаний токсичности повторных доз лекарственных средств», «в принципе, высокие дозы должны вызывать очевидные токсические реакции у животных, низкие дозы должны быть эквивалентны или превышать эффективную дозу у животных или при клиническом использовании, а средние дозы должны устанавливаться между высокими и низкими дозами на основе токсического механизма и характеристик для изучения зависимости токсичности от дозы».
На практике, учитывая высокую стоимость токсикологических тестов, проведение теста на определение диапазона доз (DRF) с несколькими нечеловекообразными приматами является наиболее экономически эффективным и трудосберегающим методом. Доза для тестов DRF также должна быть дополнительно установлена на основе предварительных исследований безопасности, проведенных во время раннего определения PCC и фармакологических исследований. Многие учреждения теперь также проводят тесты на острую токсичность наряду с тестами DRF, которые являются тестами не по GLP, как указано в M3 (R2), следуя принципу 3R для сокращения использования животных.
Для групп с низкой, средней и высокой дозой обычно используется интервал 2-3 раз. В формальных токсикологических тестах идеальная ситуация заключается в том, что группа с высокой дозой может продемонстрировать очевидную токсичность, а группы с низкой или средней дозой могут использоваться в качестве NOAEL.
Кроме того, для выбора максимальной дозы M3 (R2) также дает стандартные ответы. Проще говоря, максимальная доза в токсикологии должна быть либо максимально переносимой дозой (МПД), либо максимально возможной дозой (МПД, которую можно понимать как максимальную дозу, которую животные могут переносить на основе характеристик продукта и животного), либо она должна достигать насыщения экспозиции, либо уровень экспозиции должен быть достаточно высоким (достигая 50-кратной предполагаемой клинической дозы). В целом, 1000 мг/кг/день считается достаточным, если предполагаемая клиническая доза не достигает 1 г/день, а уровень экспозиции 1000 мг/кг не достигает 10-кратного уровня клинической экспозиции, в этом случае вам необходимо дополнительно увеличить дозу до 10-кратного уровня клинической экспозиции, или 2000 мг/кг/день, или МПД.
5. Какие исследования в области доклинических исследований безопасности должны соответствовать принципам GLP, а какие — нет?
Отвечать:Фармакологические и фармакокинетические исследования не обязательно должны соответствовать GLP, в то время как исследования фармакологической безопасности, генотоксичности, репродуктивной токсичности и токсичности повторных доз должны соответствовать GLP.
6. Какова продолжительность доклинических исследований токсичности повторных доз?
Отвечать:Требования к продолжительности для поддержки проведения клинических испытаний и одобрения рынка различаются и должны быть специфичны для периода дозирования клинических испытаний. Например, для пациентов с рассеянным склерозом минимальный запланированный период клинических испытаний составляет два года. Поэтому при включении пациентов с рассеянным склерозом в клинические испытания требуется 6-месячное исследование хронической токсичности на грызунах и 9-месячное исследование хронической токсичности на негрызунах, что достаточно для поддержки одобрения рынка. Для неонкологических препаратов исследование хронической токсичности в течение 4-недель обычно используется для поддержки периода дозирования, не превышающего 4 недель для первых клинических испытаний на людях.
7. Как выбрать экспериментальных животных для доклинической оценки безопасности?
Отвечать:Обычно используются два типа животных: грызуны с крысами являются предпочтительным выбором, и негрызуны с собаками породы бигль являются предпочтительным выбором. Конечно, следует также соблюдать принципы анализа, специфичные для конкретного продукта. Для малых молекул выбор видов должен в основном учитывать метаболические характеристики исследуемого продукта у животных, которые похожи на людей. Можно сослаться на «Анализ и идентификационный тест метаболитов исследуемых продуктов у мышей CD-1, крыс SD, собак породы бигль, обезьян-крабоедов и микросом печени человека», выбирая виды с метаболическими характеристиками, похожими на человеческие, то есть виды с похожими на людей количествами и типами метаболитов. Кроме того, выбранные виды должны быть чувствительны к исследуемому продукту. Исходя из прошлого опыта, для препарата с малыми молекулами его метаболические характеристики у собак породы бигль могут быть похожими на человеческие, но с низким воздействием.
