Анализ спинномозговой жидкости (СМЖ) является мощным инструментом для улучшения обнаружения различных процессов, происходящих в центральной нервной системе, таких как кровотечение, воспаление, инфекция, опухоли и другие клинические состояния. Кроме того, серийные оценки соединений в СМЖ (таких как гормоны, лекарства, нейротрансмиттеры, биомаркеры, метаболиты и вирусы) одинаково важны как в фундаментальных, так и в трансляционных исследованиях. Объем СМЖ в центральной нервной системе поддерживается стабильным за счет секреции и абсорбции.
I. Эксплуатационные соображения
Обычно СМЖ собирают либо через желудочек мозга, либо через люмбальную пункцию. Люмбальная пункция несет относительно низкий риск осложнений у нечеловекообразных приматов, поскольку у большинства видов место люмбальной пункции находится далеко от конца спинного мозга. Необходимы надлежащие анестезия и асептические методы, включая подготовку места, такую как бритье, и использование стерильных материалов. Следует использовать как минимум стерильные перчатки, шприцы и иглы, с учетом стерильных хирургических простыней. Сбор СМЖ обычно выполняется в боковом положении, положении лежа на груди или сидя, что улучшает доступ к желудочкам мозга или увеличивает межпозвоночное пространство за счет сгибания шеи или позвоночника. Размер и длина выбранной иглы должны подходить для вида и размера нечеловекообразных приматов. Методики, оборудование, расходные материалы, используемые во время процедуры, и периоперационный уход различаются в зависимости от вида, целей исследования и предпочтений клинического ветеринара.
Некоторые протоколы исследований могут потребовать непрерывного сбора СМЖ в течение времени или сбора образцов СМЖ у неанестезированных субъектов. Для этих протоколов непрерывный сбор СМЖ у бодрствующих резус-макак может быть достигнут с помощью долгосрочных имплантированных катетеров СМЖ, подключенных к подкожным портам сбора.
Автор приложил все усилия, чтобы найти последние ссылки относительно общего объема СМЖ, ограничений или рекомендаций для дуральных пункций, частоты сбора, безопасного объема изъятия и скорости пополнения СМЖ. Литература по этому аспекту ограничена для большинства нечеловекообразных приматов. Кроме того, методы сбора различаются, поскольку опросы членов Ассоциации ветеринарии нечеловекообразных приматов показывают, что различные учреждения успешно используют разные методы для сбора СМЖ. Поэтому автор приводит соображения и рекомендации по сбору СМЖ на основе имеющихся лучших доказательств.
Для справки, предыдущие исследования определили, что кажущийся объем СМЖ у взрослых самцов макак-резусов (8,0-10.6 кг) составляет 10+/-0.06 мл, при скорости потока СМЖ 0,018+/-0.003 мл/мин. Скорость образования СМЖ у макак-резусов колеблется от 28,6-44.2 мкл/мин. Необходимы дальнейшие исследования на нечеловекообразных приматах в этой области, чтобы способствовать разработке более поучительных рекомендаций.
II. Возможные побочные реакции
Хотя осложнения во время сбора СМЖ у нечеловекообразных приматов редки, анатомические вариации и неправильные или неадекватные технические методы могут привести к повреждению образца или осложнениям, таким как кровотечение, грыжа, инфекция, повреждение ствола мозга, спинного мозга или нервных корешков, а также дискомфорт у животных. Хотя эти осложнения редки, они могут поставить под угрозу благополучие животных.
Из-за связанных с этим рисков сбор СМЖ должен проводить ветеринар или обученный ветеринарный персонал. В случае неудачных попыток сбора СМЖ практика может различаться. Обычно допускается до трех неудачных попыток одним человеком. После третьей неудачной попытки другой квалифицированный человек должен взять на себя эту работу. Если второй человек не может собрать СМЖ после трех попыток, попытки следует прекратить. Тем временем животное получит соответствующее обезболивающее лечение и отойдет от анестезии. Изменение места сбора (например, с желудочков мозга на поясничные) после неудачных попыток часто приводит к успеху. Если попытка не удалась без визуализации, можно использовать размещение иглы с помощью флюороскопии. Помимо повышения процента успеха, визуализация также может снизить процент травматических проколов.
Послеоперационный мониторинг должен продолжаться до тех пор, пока животное не вернется в свою клетку и не сможет сохранять вертикальное положение без поддержки. Мониторинг животных должен длиться не менее 24 часов или в соответствии с протоколом, одобренным Комитетом по уходу и использованию животных в учреждениях (IACUC). Мониторинг должен включать оценку основных физиологических, поведенческих и локомоторных параметров. Признаки неврологической дисфункции, включая, помимо прочего, летаргию, депрессию, кому и признаки давления на голову, должны оцениваться в частности. Головные боли и последующая внутричерепная гипотензия после сбора спинномозговой жидкости не являются редкостью в человеческой медицине. Учитывая это потенциальное осложнение у нечеловекообразных приматов, анальгезирующую терапию следует проводить во время операции и продолжать в течение 2-3 дней после операции или по мере необходимости на основе послеоперационных наблюдений, связанных с поведением, связанным с головной болью или болью в позвоночнике. Наиболее эффективный режим анальгезии может включать комплексное лечение, начатое до операции.
III. Соображения IACUC и ведение записей
IACUC должен быть знаком с процедурами, связанными со сбором СМЖ, и всеми потенциальными осложнениями и пересматривать их не реже одного раза в год. Вся соответствующая информация, такая как дозировки лекарств, предоперационная подготовка, объемы собранной СМЖ, частота сбора, а также краткосрочное и долгосрочное послеоперационное восстановление, должна быть описана в протоколе IACUC и надлежащим образом задокументирована в медицинских записях или лабораторных журналах.
Хотя данные CSF могут быть критически важными в исследовательских протоколах, неправильные методы сбора могут повлиять на благополучие животных. При подаче протоколов следует предоставить научное обоснование количества и частоты сборов. В частности, IACUC должен тщательно оценить каждое предложение, касающееся сбора CSF, и рассмотреть следующее:
1.Важен ли сбор цереброспинальной жидкости для достижения научных целей, изложенных в протоколе?
2. Существуют ли альтернативные методы и менее инвазивные методы оценки центральной нервной системы (например, методы визуализации), и если да, рассматривались ли они?
3. Прошли ли операторы соответствующую подготовку и обладают ли они достаточными навыками?
4.Будут ли предоставлены соответствующие периоперационные схемы анестезии и анальгезии? Следует проконсультироваться с ветеринарами, специализирующимися на лабораторных животных, относительно планов анестезии и анальгезии.
5.Учитывает ли объем собранной спинномозговой жидкости возраст и размер животного?
6.Подходят ли количество и частота пункций твердой мозговой оболочки для животного, и был ли риск осложнений сведен к минимуму? Если в исследование входит несколько сборов СМЖ, следует указать максимальное время сбора для каждого животного.
7.Адекват ли план послеоперационного наблюдения?
8. Были ли рассмотрены все возможные послеоперационные осложнения и перечислены все разумные вмешательства, включая эвтаназию?
